细胞计数仪
细胞计数仪：U937 细胞
U937 细胞于 1974 年从一例 37 岁男性患者的组织细胞性淋巴瘤细胞中分离而来。它们是仅有的少数几种表达许多单核细胞特征的细胞系之一，因此经常用来研究单核细胞的行为和分化。用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（ GM-CSF；Okuma 等人，2000 年）处理后，U937 细胞会凋亡，这使之成为一种适用于凋亡细胞信号转导研究的有用模型。
图 1：使用 SpectraMax MiniMax 细胞计数仪获得的图像
使用 SoftMax Pro 软件中的预定义分析设置“CellsC”来识别 U937 细胞。左：透射光图像；右：StainFree 分析，紫色掩膜为软件识别出的细胞。
图 2：StainFree 细胞计数 vs 荧光细胞计数
U937 细胞接种的密度范围为每孔 156-20,000 个细胞，胞核使用 EarlyTox™ 活细胞绿色染料染色。每孔获得 1 个位置的图像。随后，每个图像中的细胞使用 StainFree 方法（蓝色图）或通过计算绿色荧光胞核数（红色图）来进行计数。
图 3：EarlyTox 活细胞/死细胞检测
U937 细胞用浓度范围为 0 ng/mL-20 ng/mL 的 GM-CSF（蓝色图）、TNFα（红色图）或 TNFα + GM-CSF（绿色图）处理 48 小时。随后使用 EarlyTox™ 活细胞/死细胞检测试剂盒检测它们的活性。使用 SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机检测荧光。活细胞/死细胞荧光信号比值和细胞因子浓度绘制成图，结果显示在合用 TNFα 和 GM-CSF 时，经处理的细胞的细胞活性丢失尤为严重。
图 4：EarlyTox Caspase-3/7 R110 检测
U937 细胞用浓度范围为 0 ng/mL - 20 ng/mL 的 TNFα + GM-CSF（绿色图）、TNFα（红色图）或仅 GM-CSF（蓝色图）处理 48 小时。随后使用 EarlyTox™ Caspase-3/7 R110 测定法检测它们的 caspase-3/7 活性。使用 SpectraMax i3x 读板机检测表示 caspase 活性的荧光信号。细胞同时用 TNFα 和 GM-CSF 处理时，观察到 caspase 活性最高，表明能协同激活 caspase。
图 5：EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 检测
U937 细胞用 10 ng/mL TNFα 和 GM-CSF（顶排）处理 48 小时或不处理（底排）。随后使用 EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView™ 488 测定法进行检测。绿色荧光染色可识别出含活化 caspase-3/7 的细胞。左小图：细胞透射光图像；右小图：表示含活化 caspase-3/7 的细胞的绿色荧光图像。
提示：
U937 细胞放在悬浮液中生长，形状为圆形，因此容易进行计数。对于 StainFree 计数，只需使用 SoftMax Pro 软件的下拉菜单中预定义的分析设置“CellsC”，即可一键分析细胞图像。
U937 细胞分析工具包
- SpectraMax® i3 多功能微孔板检测平台
- SpectraMax® MiniMax™ 300 细胞成像仪
- SoftMax® Pro 软件
透射光 (TL)
541 nm（绿色荧光）
TL 曝光：7 ms
TL 对焦调节：-5 µm
541 曝光：1 ms
541 对焦调节：40µm
分析类型：离散对象分析
识别对象所需波长：TL (StainFree) 或 541（绿色胞核）
TL：CellsC（预定义）
541：设置尺寸和密度：尺寸 = 10-30 µm，密度大于背景 = 150
关于 StainFree 细胞检测技术
细胞成像检测通常需要借助荧光染料对细胞进行标记，但荧光染料会对活细胞产生毒性，或者仅可用于固定的细胞。用于分析细胞计数和细胞融合度的无标记方法可帮助研究人员定量监测细胞增殖和健康状况，无需进行可能会影响细胞活力且耗时的工作流程。
具备 MiniMax 300 成像细胞仪的 SpectraMax i3/i3x 多模式微孔板平台采用较独特且StainFree 细胞检测技术，让您能够进行细胞增殖、毒性和其他测定，无需使用可与 DNA 相结合的胞核染色，如 DAPI，或从长远来看确实会对细胞产生毒性的活细胞染料。