开发稳定细胞株用于疫苗生产
简化您的稳定细胞株开发工作流程
稳定细胞系生成是生物制药研究的基石，特别是在疫苗开发和治疗性蛋白质生产方面。这一关键过程涉及对克隆衍生的细胞群进行工程改造，以维持所需表型的稳定表达，如高产重组蛋白质生产。通过系统性优化此工作流程，研究人员可加快开发时间、提高可重复性并确保产品质量的一致性。
我们的综合指南概述了稳定细胞系生成过程（从稳定转染到滴度筛选）的基本步骤。无论您是在开发用于抗体生产的细胞系还是其他生物治疗方法，了解和完善每个步骤于成功而言都至关重要。
稳定细胞系构建的工作流程
第 1 步：稳定转染
该过程始于将外源 DNA（编码感兴趣的重组蛋白质）引入宿主细胞中，此步骤称为转染。虽然大多数细胞在短时间内都会瞬时表达这种蛋白质，但仍有一部分细胞将 DNA 整合到其基因组中，从而得到稳定转染的细胞。由于这些细胞能长时间表达蛋白质，因此被选来进行后续步骤。
第 2 步：细胞池富集
稳定转染后，研究人员通过分离那些保持高表达水平的细胞来富集细胞群。此步骤通常利用绿色荧光蛋白质 (GFP) 等可选标记物来区分稳定转染的细胞。GFP 荧光强度与重组蛋白质水平密切相关，这使其成为富集高产细胞池的有效工具。
第 3 步：单细胞分离
细胞池富集通常会得到蛋白质表达水平不同的异质细胞群。为获得基因一致的细胞群，单细胞分离就至关重要。此举可确保克隆性，这对于符合法规和获得可重现的结果至关重要。研究人员使用有限稀释、流式细胞术或高级成像系统等技术来分离单个细胞。
第 4 步：单克隆性验证和细胞生长
单克隆性验证可确保衍生菌落源于单个细胞。先进的细胞成像技术可记录这一阶段，从而为监管提交提供证据。分离后，对细胞进行生长和生产力监测，以确保其符合所需标准。
第 5 步：滴度和关键质量属性 (CQA) 筛选
最后一步是评估稳定细胞系的生产力和质量。研究人员通过检测蛋白质滴度来测定所产重组蛋白质的浓度。另外还评估糖基化模式或抗体结构等关键质量属性 (CQA)，以确保最终产品符合治疗标准。
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