AAV 质粒
什么是 AAV 质粒？
AAV（腺相关病毒）是生物制造中普遍存在的一种微小病毒，因其有限的复制和较低人体免疫原性而备受青睐。生产用于基因转移的高水平病毒载体需要复杂的生物制造工艺，包括质粒 DNA 生产和其他复杂步骤。
AAV 质粒生产工作流程
- 细胞培养： AAV DNA 载体构建和质粒扩增。制备和扩增编码产生重组 AAV 颗粒所需的所有因子的质粒。
- 适应培养条件： 根据工艺要求优化悬浮或贴壁培养系统，包括 3D 或 2D 形式。
- AAV 载体生产： 将 AAV 载体 DNA 瞬时引入细胞中，或建立稳定的细胞系，以进行持续 2-3 天的复制和表达。
- AAV 回收： 过滤并离心细胞培养基以清除碎片，浓缩 AAV 载体。切向流过滤 (TFF) 可用于进一步纯化。从细胞培养基或裂解物中捕获和回收 AAV 颗粒时，应遵循用于重组蛋白的标准技术，包括沉淀、离心、层析和切向流过滤。
- AAV 纯化： 使用超速离心和层析，如亲和或离子交换，以实现高纯度 AAV 载体制备。在整个工艺过程中做好质量控制。
- AAV 滴定： 可采用包括实时 PCR 在内的标准技术进行 AAV 载体定量和定性分析，以确定最高滴度。
- 哺乳动物细胞的转导： 纯化的 AAV 颗粒可用于靶标哺乳动物细胞系的转导，包括 IPSC、3D 类器官和 CAR-T 细胞疗法。
- 克隆筛选和选择： 需要克隆筛选来识别成功转导的克隆。可采用高通量自动化方法进行高价值的克隆选择和混合富集。
- 解决异质性和单细胞分离： 通过单细胞分离技术以及基于图像的分析来解决克隆池异质性，从而确保可证明现有 AAV 转导细胞系的单克隆性。
- 扩增和特性鉴定： 靶细胞系的下游特性鉴定可通过高内涵成像自动化解决方案和 ELISA 检测进行。
优化您的 AAV 质粒生产工作流程的创新解决方案
在 Molecular Devices，我们了解 AAV 质粒生产的复杂性。我们的先进技术解决方案套件经过精心设计，可支持和优化您工作流程的每个阶段。我们专注于精确度、效率和可扩展性，致力于在您的 AAV 质粒生产过程中的每一步实现卓越，确保您的企业获得行业领先的结果。
QPix™ 微生物克隆筛选系统
AAV 工作流程中的应用：
- 用于 AAV DNA 载体构建和质粒扩增阶段。
- 有效挑取包含所需质粒结构的克隆。
- 可用于筛选具有特定表型的克隆，确保选择正确的质粒结构。
特点：
- 每小时可拣选多达 3,000 个克隆。
- 支持各种微生物和选择模式。
- 通过紫外光消毒和针清洗确保无菌。
- 提供多种成像模式以实现精确的克隆选择。
- 提供自动化平板接种和划线功能。
- 可扩展的自动化选项，能满足不同的通量需求。
ClonePix™ 哺乳动物细胞克隆筛选系统
AAV 工作流程中的应用：
- 用于克隆筛选和选择阶段。
- 根据蛋白生产率和其他属性筛选并选择高价值克隆。
特点：
- 用于选择高价值克隆的自动化系统。
- 增加找到最佳细胞系的概率。
- 提供多种检测方法，包括荧光检测。
- 通过紫外灯和挑针清洗保持无菌。
- 使用半固体培养基形成离散克隆。
CloneSelect™ Imager 细胞生长分析系统 FL
AAV 工作流程中的应用：
- 用于扩增和特性鉴定阶段。
- 提供哺乳动物细胞的成像和分析，确保单克隆性。
- 可用于验证基因编辑。
特点：
- 提供白光和荧光成像。
- 生成自动融合度分析和单克隆性保证。
- 快速采集，可在两分钟内对 96 孔板进行成像。
- 兼容各种细胞类型，包括中国仓鼠卵巢细胞 (CHO)、人胚肾细胞 (HEK) 和 iPSC。
- 提供高分辨率图像和智能分析。
DispenCell™ 单细胞分配器
AAV 工作流程中的应用：
- 用于解析异质性和单细胞分离阶段。
- 分配单细胞，确保已建立的 AAV 转导细胞系的单克隆性。
特点：
- 即时和可追溯的克隆性证明。
- 轻柔地处理细胞可保持细胞活性。
- 紧凑型设计适合各种实验室环境。
- 使用一次性吸头防止交叉污染。
- 界面直观，无需校准。